甘蔗是我國最重要的糖料作物，它不僅是食糖業(yè)的重要原料，而且是能源、化工、釀酒和飼料的原料。甘蔗節間含有大量的糖分，主要有葡萄糖、果糖和蔗糖這三種糖類(lèi)碳水化合物。無(wú)論是感官還是研究表明，甘蔗在不同生長(cháng)時(shí)期、不同節間糖分含量存在較大差異。因此分析測定甘蔗不同時(shí)期、不同節間糖含量，分析多種糖分生長(cháng)積累的規律，進(jìn)而運用統計分析的方法了解蔗糖分積累與糖代謝相關(guān)酶活性變化之間的關(guān)系，從生長(cháng)機理各個(gè)方面探討研究甘蔗生長(cháng)過(guò)程和糖分積累的規律，并為甘蔗高產(chǎn)高糖栽培及遺傳改良等提供理論上的依據。
糖含量的測定方法有化學(xué)比色法、旋光法、氣相色譜法和液相色譜法。一般化學(xué)法只能測定各種糖的總量而不能分別測定各種糖的含量，并且有研究表明，測得的葡萄糖、果糖值比實(shí)際值略高而存在偏差，極有可能影響甘蔗品質(zhì)的判斷。氣相色譜法雖可分別測定不同糖的含量，靈敏度高，但是由于糖類(lèi)化合物沸點(diǎn)高，難以汽化，必須進(jìn)行衍生化反應才可檢測，樣品處理、分析檢測步驟較為繁瑣，且認為干擾誤差較大。
譜析色譜實(shí)驗室，采用本公司生產(chǎn)的LC-3000高效液相色譜儀分析檢測蜂蜜、菠蘿、馬鈴薯等中不同糖類(lèi)碳水化合物含量，已在實(shí)際應用中取得良好的分析效果，得到客戶(hù)的肯定。目前，甘蔗節間糖類(lèi)碳水化合物含量測定目前報道主要采用一般的化學(xué)方法。譜析儀器公司充分吸收國內外相關(guān)研究方案，對分析條件進(jìn)一步優(yōu)化，采用碳水化合物分析專(zhuān)用色譜柱對甘蔗節間糖分進(jìn)行分離分析，建立一種簡(jiǎn)便、快速和準確可靠的，能同時(shí)測定果糖、葡萄糖、蔗糖含量的高效液相色譜儀分離法。
1.儀器與試劑
高效液相色譜儀LC-3000（山東譜析），示差折光檢測器，針孔進(jìn)樣器。葡萄糖、果糖、蔗糖標樣為國產(chǎn)色譜純(純度均不低于99.5%)，乙腈為色譜純，實(shí)驗用水為超純水。
2.色譜分析條件
色譜柱：Agilent Zorbax carbohydrate柱(4.6mm×250mm，5.0μm)；流動(dòng)相為乙腈-水(75:25，V/V)；柱溫30℃；檢測池溫度35℃；流速1.0mL/min，進(jìn)樣量20μL。
3.糖標準溶液的配制
準確稱(chēng)取果糖、葡萄糖、蔗糖各2.0g(精確到0.0001g)，轉移至100mL容量瓶中，用高純水定容至刻度，得到各自質(zhì)量濃度均為20mg/mL的混標溶液。逐級稀釋至10、5、2.5、1.25、0.625mg/mL。上機進(jìn)樣分析前經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾。每個(gè)樣品重復3次。
4.樣品處理
將冷凍的節間樣品去皮，切碎，在液氮中磨成粉末狀，精確稱(chēng)取樣品粉末1.00g(精確到0.0001g)，加入80%的乙醇5mL，80℃恒溫水浴30min后，12000r/min離心20min，取上清液，殘渣加入5mL 80%的乙醇溶液重復提取1次，合并提取上清液，90℃水浴中蒸干乙醇，加入高純水定容至5mL，混勻后用一次性注射器抽取提取樣液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后以備上機進(jìn)樣分析。每個(gè)樣品重復3次。
譜析分析結果表明，采用高效液相色譜儀分析甘蔗節間果糖、葡萄糖、蔗糖，保留時(shí)間重現性好，三者的含量和峰面積比值之間呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，相對標準偏差較好，加標回收率準確度較高，是一種檢測分析甘蔗節間糖分組成和含量的簡(jiǎn)便、快速、準確的方法。如有相關(guān)分析需求請與山東譜析科學(xué)儀器有限公司0632-5571618聯(lián)系，亦可登錄公司網(wǎng)站在線(xiàn)即時(shí)了解咨詢(xún)。
